一、前言 佐劑是疫苗的一種添加劑,當它先於抗原或與抗原混合注入機體後,能夠增強機體對抗原的免疫應答或者改變免疫反應的類型,屬於非特異性的免疫增強劑。隨著現代生物技術和基因工程技術的迅速發展,針對不同疾病已開展了各種新型基因工程疫苗的研製,佐劑尤其是新型免疫佐劑的研究就顯得尤為迫切。 在標準 T/CVDA02《複合礦物油動物疫苗佐劑》中,對於佐劑的質量檢測中有明確規定測定羥值含量,本方法參考其中的檢測方法製定了運用電位滴定檢測的方法。該方法檢測方便,減少了人為判斷指示劑顏色對結果的誤差影響,增加了檢測精確度,並且提高了檢測效率,解放操作員的雙手。 二、儀器與試劑 2.1、儀器 JH-T6 全自動電位滴定儀,PH 複合電極,水浴鍋,分析天平等。 2.2、試劑 酰化試劑(取對甲苯磺酸 14.4g, 置幹燥的 500ml 具塞錐形瓶中,加醋酸乙酯 360ml,振搖使溶解,緩緩加入醋酐 120ml 搖勻,密塞,放置 3 日後備用),吡啶-水(3:5),氫氧化鉀標準滴定液(1mol/L)。 三、實驗方法 3.1、樣品檢測 準確稱取 2g 左右樣品,置於滴定杯中,加入 5mL 酰化試劑,封口膜密封,輕輕搖動至溶解。置於 50℃水浴加熱 25min ,放冷,加吡啶-水(3:5)20mL ,5 分鍾後用氫氧化鉀標準滴定液(1mol/L),以 PH 複合電極為工作電極,在JH-T6上進行滴定至終點。同時做空白實驗。 設定滴定儀參數如表 1 所示: 表 1 滴定參數設置 滴定模式: | 動態滴定 | 最小添加體積 | 0.02mL | 電極平衡時間: | 4s | 預攪拌時間: | 60s |
電極平衡電位: | 1mv | 滴定速度: | 標準 | 結束體積: | 10mL | 相關係數: | 12.69 | 電位突躍量: | 200 | 補液速度: | 5 | 攪拌速度: | 7 | 滴定前平衡電位: | 10mv |
3.2、圖譜測試示例 
四、結果與討論 4.1、實驗結果 實驗結果如表 2 所示: 表 2 測試結果 樣品批號 | 樣品序號 | 樣品質量/g | 滴定液濃度(氫氧化鉀) /(mol/L) | 滴定體積/mL | 羥值(mg/g) | 平均值 | 20211201 | 空白 | / | 1.01838 | 26.225 | / | / | 1 | 2.01652 | 25.475 | 21.249 | 23.301 | 2 | 2.01019 | 25.386 | 23.802 | 3 | 2.01160 | 25.350 | 24.851 | 20220101 | 1 | 2.02788 | 25.365 | 24.229 | 24.335 | 2 | 2.09250 | 25.326 | 24.545 | 3 | 2.03595 | 25.361 | 24.231 |
4.2、結論 本次測定的動物疫苗佐劑的羥值均小於參考標準要求中的 25(mg/g),測試結果重複性良好,滿足檢測要求。 參考文獻 [1] T/CVDA02 複合礦物油動物疫苗佐劑[ S ].
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